儲存型液氮罐在實驗室生物實驗中的使用規(guī)范

一、細胞培養(yǎng)中使用液氮罐的一般程序

     細胞培養(yǎng)的一般過程，主要包括準備、取材、培養(yǎng)和凍存復(fù)蘇4步。為保存細胞，細胞株如果是不易突變的情況下一定要使用液氮深冷凍存。使用常規(guī)的液相液氮罐，一般實驗室使用35升125口徑儲存型液氮罐，先將細胞處理，把含有保護劑的培養(yǎng)基加入凍存管內(nèi)，管內(nèi)放有需要凍存的細胞，利用程序降溫儀，或者使用冰箱梯度降溫，后在液氮中長期保存。在-196度保存條件下，細胞保存的時間幾乎是無限的。

目前美國標準細胞庫或細胞銀行(ATCC)液氮凍存有3200個已經(jīng)過鑒定的細胞系(1992)，其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細胞系和來自不同物種的近75個雜交瘤細胞株。

二、胚胎冷凍保存技術(shù)

胚胎冷凍保存技術(shù)是指在低溫條件下利用低溫保護劑保存胚胎的一門技術(shù)。這一技術(shù)是20世紀后半葉隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，目前已成為了現(xiàn)代生命科學(xué)研究*的手段之一。動物胚胎的冷凍保存原理就是因為低溫降低了胚胎內(nèi)的變質(zhì)反應(yīng)速度，細胞保存的溫度越低，細胞及生物樣品的保存時間就越長。

目前已經(jīng)有很多種生物制品細胞胚胎等的冷凍保存深冷保存方法，包括慢速冷凍法、快速冷凍法、一步冷凍法、直接移植深冷法和玻璃冷凍，超級冷凍法都可以快速冷凍

①將胚胎在室溫下放人25％玻璃化溶液(VS液)中預(yù)處理15min；

②將預(yù)處理后的胚胎放在高濃度(75％一90％)的VS液中保存20—40min；

③將經(jīng)過兩步抗凍劑處理的胚胎直接投入液氮中保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質(zhì)，均可達到很好的長期存儲的效果